Exosomes, as extracellular organelles, are the most well-known vesicles among microvesicles. They are released from almost all body fluids as well as cells. Exosomes, which have gained popularity in biology studies with their nano-level dimensions (30-200nm) and membrane structures, are primarily used in drug encapsulation, regeneration, and cell-free cellular therapy. The fact that exosomes, which also function as biomarkers, have an ever-expanding area of use has led researchers to search for the isolation and characterization of this vesicle. In this study, the isolation of exosomes of the DLD-1 colorectal cancer line was carried out by ultracentrifugation method and characterized biophysically and biochemically by SEM, NTA, and flow cytometry, and the proliferative effect of these exosomes on HT29 cells, one of the other colorectal cancer lines, was investigated. As a result, it was proved that the isolated vesicles were morphological and size-appropriate to the literature and expressed CD63 and CD81 proteins. It was observed that DLD-1 exosomes increased proliferation on the HT29 cell line in a dose-dependent manner and 3.134μg exosomes were the statistically most effective dose. Within the framework of the findings, this study could be an excellent reference for exosome isolation and characterization.
Hücre dışı organel olarak kabul edilen eksozomlar, mikroveziküller içinde en çok bilinen veziküldür. Hücrelerin yanı sıra hemen bütün vücut sıvılarından salınır. Nano düzeydeki boyutları (30-200nm), membranlı yapılarıyla biyoloji çalışmalarında popülerlik kazanan eksozomlardan başta ilaç enkapsülasyonu, rejenerasyon, hücresiz hücresel terapi gibi alanlarda yararlanılmaktadır. Biyobelirteç işlevi de gören eksozomların günden güne genişleyen bir kullanım alanına sahip olması, araştırmacıları bu vezikülün optimum izolasyon ve karakterizasyonuna yönelik arayışlara yönlendirmiştir. Bu araştırmada DLD-1 kolorektal kanser hattına ait eksozomların izolasyonu ultrasantrifüj yöntemiyle, karakterizasyonu ise SEM, NTA ve akım sitometrisi kullanılarak gerçekleştirilmiş, bu eksozomların diğer kolorektal kanser hatlarından biri olan HT29 hücreleri üzerindeki proliferatif etkisi incelenmiştir. Sonuç olarak izole edilen veziküllerin morfolojik ve boyut olarak literatüre uygun olduğu ve CD63 ve CD81 proteinlerini ifade ettiği kanıtlanmıştır. DLD-1 eksozomlarının HT29 hücre hattı üzerinde doza bağlı olarak proliferasyonu arttırdığı görülmüştür ve 3.124μg eksozom istatistiksel olarak en etkili doz olarak belirlenmiştir. Ulaşılan bulgular çerçevesinde, bu araştırma DLD-1 eksozomlarının izolasyon ve karakterizasyonu için referans bir çalışma olabilir.
Download Article in PDF (799.8 kB)